产品货号:
HR0165
中文名称:
组织细胞总蛋白提取试剂盒(2D电泳用)
英文名称:
Total protein extraction kit(2D electrophoresis)
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取总蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白直接用于双向电泳。
组分 | 50T | 100T |
总蛋白提取液(2D) | 25mL | 50mL |
蛋白酶抑制剂混合物 | 100μL | 200μL |
磷酸酶抑制剂混合物 | 100μL | 200μL |
保存:蛋白酶抑制剂-20℃保存;磷酸酶抑制剂2~8℃保存;蛋白提取液室温保存,有效期1年。
- 使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
- 将蛋白提取的时间缩短至30分钟~1小时。
- 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
- 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
- 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
移液器、离心机、涡旋振荡器
- 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
- 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
- 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
- 细胞总蛋白提取:
- 提取液制备:每500μL的总蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物和2μL磷酸酶抑制剂混合物,混匀后备用。
- 取5~10×106个细胞,在4℃,2500×g条件离心5~10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
注:细胞数量根据实验情况调整,每次的裂解液用量并不是一定的,请根据实际情况调整。 - 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
- 每5×106个细胞中加入500μL的总蛋白提取液,混匀后,振荡15~20分钟。
- 在14000×g条件下离心15分钟。
- 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到总蛋白。
- 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
注:
● 建议用BCA法进行蛋白定量。
● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
- 提取液制备:每500μL的总蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物和2μL磷酸酶抑制剂混合物,混匀后备用。
- 组织总蛋白提取:
- 提取液制备:每500μL的总蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物和2μL磷酸酶抑制剂混合物,混匀后备用。
- 取100mg组织样本剪碎,加入总蛋白提取液,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
注:用液氮研磨的方法更佳。 - 将组织匀浆吸入干净离心管中,在14000×g条件下离心5分钟。
- 将上清吸入另一干净离心管,即可得到总蛋白。
- 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
- 提取液制备:每500μL的总蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物和2μL磷酸酶抑制剂混合物,混匀后备用。
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